2 × Так ПЦР МастерМик Ⅱ

Брза ПЦР премикс са високом ефикасношћу и високом отпорношћу на стрес.

2 × Так ПЦР МастерМик Ⅱ је ново оптимизована и надограђена 2 × ПЦР премикс спремна за употребу са свим битним деловима у ПЦР реакцији осим ДНК шаблона и прајмера.

Цат. Не Величина паковања
4993001 1мл
4993002 5к1мл
4992912 20к5к1 мл
4992913 5 × 1 мл
4992920 20 × 5 × 1 мл
4992921 20 × 5 × 1 мл

Детаљи о производу

Експериментални пример

ФАК

Ознаке производа

Карактеристике

■ Висока ефикасност амплификације: ДНК фрагменти различитих величина (мањи од 5 кб) и извори могу се ефикасно појачати.
■ Висока осетљивост: Чак 10 пг циљних фрагмената може се појачати из геномских шаблона.
■ Висока отпорност на стрес: За шаблоне са високим садржајем нечистоћа, попут грубо екстрахованог шаблона/бактеријске културе, циљни фрагмент се може лако појачати. Поновљено замрзавање и одмрзавање неће утицати на активност полимеразе.
■ Погодно за примену: Реакциони систем је припремљен лако и брзо. Ојачани фрагмент садржи 3 ′ крај дА-надвишења, што је погодно за клонирање ТА.

Спецификација

Тип: Так ДНК полимераза
Узорак: Пречишћен/грубо екстрахован шаблон/бактеријска култура
Шаблон: > 10 стр
Величина фрагмента: <5 кб
Пријаве: ПЦР амплификација фрагмената ДНК, обележавање ДНК, продужавање прајмера, одређивање секвенце, детекција гена великих размера, полуквантитативни ПЦР експерименти, детекција ДНК у траговима итд.

Сви производи се могу прилагодити за ОДМ/ОЕМ. За детаље,кликните Прилагођена услуга (ОДМ/ОЕМ)


  • Претходна:
  • Следећи:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Слика 1. Шаблони из различитих извора појачани су помоћу ТИАНГЕН Так МастерМик ИИ и уобичајене Так мешавине од добављача ТР, ради откривања отпорности реагенса на стрес. Резултати показују да производи ТИАНГЕН могу појачати циљне фрагменте из сирових геномских шаблона и бактеријске културе, а отпорност на стрес је боља од отпорности добављача ТР. О: Сирови геномски шаблон екстрахован ТИАНГЕН ТИАНцомби ДНА Лисе & Дет ПЦР комплетом. Прп/ДН: Сирова екстракција и детекција узорака људске крви. Пиринач: Сирова екстракција и детекција узорака пиринча. Б: ПЦР колоније. ПЦР фрагмент је 700 бп.
    М: ТИАНГЕН Маркер ИИИ
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Добра универзалност за шаблоне из различитих извора и различите дужине
    Слика 2. Фрагменти различитих извора и дужина су појачани коришћењем ТИАНГЕН -а Так МастерМик ИИ (А) и обичан Так Мешавина добављача ТК (Б), добављача ТР (Ц), добављача В (Д) и добављача Г (Е). Резултати показују да су свеобухватне перформансе ТИАНГЕН производа најбоље у погледу способности појачања, специфичности и универзалности.М: ТИАНГЕН Маркер ИИИ1: шаблон геномске ДНК соје (120 бп);

    2-3: Шаблона геномске ДНК пиринча (694 бп, 2258 бп);

    4: Шаблон геномске ДНК памука (200 бп);

    5: Есцхерицхиа цоли шаблон геномске ДНК (2298 бп);

    6-7: ДНК шаблон генома миша (1 кб, 2 кб);

    8-10: Шаблон геномске ДНК пацова (1 кб, 2 кб, 2080 бп);

    11-18: Шаблон ДНК хуманог генома (300 бп, 448 бп (ГЦ%: 74,8%), 1100 бп, 750 бп,

    1000 бп, 1090 бп (ГЦ%: 70,4%), 2 кб, 4 кб)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Висока осетљивост
    Слика 3. Различите концентрације фрагмената ДНК штакора и хумане ДНК појачане су помоћу ТИАНГЕНА Так МастерМик ИИ (А), обичан Так Мешавина добављача В (Б) и добављача ТК (Ц), ради откривања осетљивости појачања. Резултати показују да би ТИАНГЕН производ могао да појача циљни фрагмент из шаблона генома чак 0,01 нг, а његова осетљивост је боља од осетљивости производа из добављача В и ТК.М: ТИАНГЕН Маркер ИИИ, Н: НТЦТемплате инпут 1-8 : 200 нг, 100 нг, 50 нг, 20 нг, 10 нг, 1 нг, 0,1 нг, 0,01 нг.
    П: Нема појачања

    А-1 Темплате

    ■ Шаблон садржи протеинске нечистоће или инхибиторе Так, итд. - Очистите шаблон ДНК, уклоните протеинске нечистоће или екстрахујте шаблон ДНК комплетима за пречишћавање.

    ■ Денатурација шаблона није потпуна —— Одговарајуће повећати температуру денатурације и продужити време денатурације.

    ■ Деградација шаблона ——Поново припремите шаблон.

    А-2 Пример

    ■ Лош квалитет прајмера —— Поново синтетизујте прајмер.

    ■ Разградња прајмера —— Поделите прајмере велике концентрације у мале запремине ради очувања. Избегавајте вишеструко замрзавање и одмрзавање или дуготрајно криоконзервирање на 4 ° Ц.

    ■ Неправилно обликовање прајмера (нпр. Дужина прајмера није довољна, димер формиран између прајмера итд.) -Преизмењавање прајмера (избегавање стварања димера прајмера и секундарне структуре)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 Температура жарења

    ■ Висока температура жарења утиче на везивање прајмера и шаблона. ——Смањите температуру жарења и оптимизујте стање са градијентом од 2 ° Ц.

    А-5 Време продужења

    ■ Кратко време продужења —— Продужите време продужења.

    П: Лажно позитиван

    Феномени: Негативни узорци такође показују траке циљних секвенци.

    А-1 Контаминација ПЦР-ом

    ■ Укрштена контаминација циљне секвенце или продуката амплификације —— Пажљиво да се у негативном узорку не пипетира узорак који садржи циљну секвенцу или да се излије из епрувете за центрифугу. Реагенсе или опрему треба аутоклавирати како би се елиминисале постојеће нуклеинске киселине, а постојање контаминације треба утврдити експериментима са негативном контролом.

    ■ Контаминација реагенса —— Поразделите реагенсе и чувајте на ниској температури.

    А-2 Примеr

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    ■ Неправилан дизајн прајмера, а циљна секвенца има хомологију са секвенцом без циља. —— Прајмери ​​за поновно дизајнирање.

    П: Неспецифично појачање

    Феномени: ПЦР појачавачке траке нису у складу са очекиваном величином, велике или мале, или се понекад јављају и специфичне појачане појасеве и неспецифичне појачане појасеве.

    А-1 Пример

    ■ Лоша специфичност прајмера

    —— Прајмер за редизајн.

    ■ Концентрација прајмера је превисока —— Правилно повећајте температуру денатурације и продужите време денатурације.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањите концентрацију Мг2+: Оптимизујте Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Превелика количина ензима —— Смањите количину ензима на одговарајући начин у интервалима од 0,5 У.

    А-4 Температура жарења

    ■ Температура жарења је прениска —— Одговарајуће повећајте температуру жарења или усвојите двостепену методу жарења

    А-5 ПЦР циклуси

    ■ Превише циклуса ПЦР -а - Смањите број циклуса ПЦР -а.

    П: Закрпљене или размазане траке

    А-1 Пример—— Лоша специфичност ——Пројектирајте прајмер, промените положај и дужину прајмера како бисте побољшали његову специфичност; или извршите угнежђену ПЦР.

    А-2 ДНК шаблона

    —— Шаблон није чист—— Очистите шаблон или извуците ДНК сетовима за пречишћавање.

    А-3 мг2+ концентрација

    ——Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањити Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 дНТП

    —— Концентрација дНТП -а је превисока —— Смањите концентрацију дНТП -а на одговарајући начин

    А-5 Температура жарења

    —— Прениска температура жарења —— Одговарајуће повећати температуру жарења

    Циклуси А-6

    —— Превише циклуса ——Оптимизујте број циклуса

    П: Колико ДНК шаблона треба додати у 50 μл ПЦР реакциони систем?
    ytry
    П: Како појачати дугачке фрагменте?

    Први корак је одабир одговарајуће полимеразе. Обична Так полимераза не може се лекторисати због недостатка 3'-5 'егзонуклеазне активности, а неусклађеност ће у великој мери смањити ефикасност продужења фрагмената. Због тога обична Так полимераза не може ефикасно појачати циљне фрагменте веће од 5 кб. Так полимеразу са посебном модификацијом или другу полимеразу високе верности треба изабрати како би се побољшала ефикасност продужења и задовољиле потребе појачања дугих фрагмената. Осим тога, појачавање дугих фрагмената такође захтева одговарајуће прилагођавање дизајна прајмера, време денатурације, време продужења, пХ пуфера итд. Обично прајмери ​​са 18-24 бп могу довести до бољег приноса. Да би се спречило оштећење шаблона, време денатурације на 94 ° Ц треба смањити на 30 секунди или мање по циклусу, а време за повећање температуре на 94 ° Ц пре појачања треба да буде мање од 1 минута. Штавише, подешавање температуре продужења на око 68 ° Ц и пројектовање времена продужења према брзини од 1 кб/мин може обезбедити ефикасно појачавање дугих фрагмената.

    П: Како побољшати веродостојност амплификације ПЦР -а?

    Стопа грешака у амплификацији ПЦР -а може се смањити употребом различитих ДНК полимераза високе верности. Међу свим до сада пронађеним Так ДНК полимеразама, Пфу ензим има најмању стопу грешака и највећу верност (види приложену табелу). Поред селекције ензима, истраживачи могу додатно смањити стопу мутације ПЦР -а оптимизацијом реакционих услова, укључујући оптимизацију састава пуфера, концентрацију термостабилне полимеразе и оптимизацију броја циклуса ПЦР -а.

    Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је