2 × Так ПЦР мешавина

Ултра чиста и ефикасна Так ДНК полимераза.

Так ДНК полимераза је рекомбинантни протеин молекулске тежине 94 кДа, који је индукован и експримиран из Есцхерицхиа цоли клонираног геном Тхермо акуатица ДНА полимеразе, а затим пречишћен и одвојен у три корака пречишћавања колоне. Ензим има добру стабилност и јаку специфичност, без егзогене нуклеазе и бактеријског загађења ДНК, и погодан је за рутинску ПЦР амплификацију.

Так МастерМик са једном цеви (Национална сертификација производа високе технологије)

■ Так МастерМик је побољшао специфичност и осетљивост ПЦР реакције и може појачати сложене шаблоне са високим садржајем ГЦ, секундарном структуром и слично. Могу се појачати само 2 копије циљног шаблона, обезбеђујући прецизније експерименталне резултате.

■ Јединствена Так МастерМик формула чини читав реакциони систем веома стабилним, а на активност неће утицати понављано замрзавање-одмрзавање или дуготрајно складиштење на 4 ° Ц.

■ Стабилан и ефикасан унапред припремљен ПЦР мешани раствор може учинити операцију брзом и једноставном, значајно смањујући интензитет рада и грешке у узорковању. ПЦР појачивач и оптимизатор високих перформанси су такође укључени у мешавину, што смањује захтеве у погледу ПЦР услова.

■ Овај производ има системе који садрже боје и боје. МастерМик производи који садрже боје могу се директно електрофорезирати након ПЦР-а, без пуфера за пуњење.

Цат. Не Величина паковања
4992229 1мл
4992230 5*1 мл
4992255 1 мл
4992256 5 × 1 мл

Детаљи о производу

Експериментални пример

ФАК

Ознаке производа

Дефиниција активности

Активност 1 јединице (У) Так ДНК полимеразе дефинисана је као количина ензима потребна за уградњу 10 нмол деоксинуклеотида у супстанце растворљиве у киселини при 74 ° Ц у року од 30 минута користећи активирану ДНК сперме лососа као шаблон/прајмер.

Контрола квалитета

Чистоћа помоћу СДС-ПАГЕ детекције је већа од 99%; Није откривена активност егзогене нуклеазе; Ген са једном копијом у људском геному могао би се ефикасно појачати; Нема значајних промена активности ако се чувају на собној температури недељу дана.

Главни технички параметри

Ензим има 5′-3 ′ полимеразну активност и 5′-3 ′ егзонуклеазну активност, и без 3′-5 ′ егзонуклеазне активности. Брзина продужења полимеризације ДНК је 1-2 кб/мин на 70-75 ℃. ПЦР производ има преграде од 3'-дА, који се могу директно клонирати у вектору за клонирање ТА.

Апликације

Обично се користи за амплификацију, продужавање прајмера, секвенцирање и А-таилинг на тупом крају ДНК који је <6 кб и захтева ниске верности.

Сви производи се могу прилагодити за ОДМ/ОЕМ. За детаље,кликните Прилагођена услуга (ОДМ/ОЕМ)


  • Претходна:
  • Следећи:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Коришћење хумане геномске ДНК као шаблона за амплификацију фрагмента од 1 кб
    Experimental Example Након ПЦР реакције, узмите 5 μл за детекцију електрофорезе.
    П: Нема појачања

    А-1 Темплате

    ■ Шаблон садржи протеинске нечистоће или инхибиторе Так, итд. - Очистите шаблон ДНК, уклоните протеинске нечистоће или екстрахујте шаблон ДНК комплетима за пречишћавање.

    ■ Денатурација шаблона није потпуна —— Одговарајуће повећати температуру денатурације и продужити време денатурације.

    ■ Деградација шаблона ——Поново припремите шаблон.

    А-2 Пример

    ■ Лош квалитет прајмера —— Поново синтетизујте прајмер.

    ■ Разградња прајмера —— Поделите прајмере велике концентрације у мале запремине ради очувања. Избегавајте вишеструко замрзавање и одмрзавање или дуготрајно криоконзервирање на 4 ° Ц.

    ■ Неправилно обликовање прајмера (нпр. Дужина прајмера није довољна, димер формиран између прајмера итд.) -Преизмењавање прајмера (избегавање стварања димера прајмера и секундарне структуре)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 Температура жарења

    ■ Висока температура жарења утиче на везивање прајмера и шаблона. ——Смањите температуру жарења и оптимизујте стање са градијентом од 2 ° Ц.

    А-5 Време продужења

    ■ Кратко време продужења —— Продужите време продужења.

    П: Лажно позитиван

    Феномени: Негативни узорци такође показују траке циљних секвенци.

    А-1 Контаминација ПЦР-ом

    ■ Укрштена контаминација циљне секвенце или продуката амплификације —— Пажљиво да се у негативном узорку не пипетира узорак који садржи циљну секвенцу или да се излије из епрувете за центрифугу. Реагенсе или опрему треба аутоклавирати како би се елиминисале постојеће нуклеинске киселине, а постојање контаминације треба утврдити експериментима са негативном контролом.

    ■ Контаминација реагенса —— Поразделите реагенсе и чувајте на ниској температури.

    А-2 Примеr

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    ■ Неправилан дизајн прајмера, а циљна секвенца има хомологију са секвенцом без циља. —— Прајмери ​​за поновно дизајнирање.

    П: Неспецифично појачање

    Феномени: ПЦР појачавачке траке нису у складу са очекиваном величином, велике или мале, или се понекад јављају и специфичне појачане појасеве и неспецифичне појачане појасеве.

    А-1 Пример

    ■ Лоша специфичност прајмера

    —— Прајмер за редизајн.

    ■ Концентрација прајмера је превисока —— Правилно повећајте температуру денатурације и продужите време денатурације.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањите концентрацију Мг2+: Оптимизујте Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Превелика количина ензима —— Смањите количину ензима на одговарајући начин у интервалима од 0,5 У.

    А-4 Температура жарења

    ■ Температура жарења је прениска —— Одговарајуће повећајте температуру жарења или усвојите двостепену методу жарења

    А-5 ПЦР циклуси

    ■ Превише циклуса ПЦР -а - Смањите број циклуса ПЦР -а.

    П: Закрпљене или размазане траке

    А-1 Пример—— Лоша специфичност ——Пројектирајте прајмер, промените положај и дужину прајмера како бисте побољшали његову специфичност; или извршите угнежђену ПЦР.

    А-2 ДНК шаблона

    —— Шаблон није чист—— Очистите шаблон или извуците ДНК сетовима за пречишћавање.

    А-3 мг2+ концентрација

    ——Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањити Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 дНТП

    —— Концентрација дНТП -а је превисока —— Смањите концентрацију дНТП -а на одговарајући начин

    А-5 Температура жарења

    —— Прениска температура жарења —— Одговарајуће повећати температуру жарења

    Циклуси А-6

    —— Превише циклуса ——Оптимизујте број циклуса

    П: Колико ДНК шаблона треба додати у 50 μл ПЦР реакциони систем?
    ytry
    П: Како појачати дугачке фрагменте?

    Први корак је одабир одговарајуће полимеразе. Обична Так полимераза не може се лекторисати због недостатка 3'-5 'егзонуклеазне активности, а неусклађеност ће у великој мери смањити ефикасност продужења фрагмената. Због тога обична Так полимераза не може ефикасно појачати циљне фрагменте веће од 5 кб. Так полимеразу са посебном модификацијом или другу полимеразу високе верности треба изабрати како би се побољшала ефикасност продужења и задовољиле потребе појачања дугих фрагмената. Осим тога, појачавање дугих фрагмената такође захтева одговарајуће прилагођавање дизајна прајмера, време денатурације, време продужења, пХ пуфера итд. Обично прајмери ​​са 18-24 бп могу довести до бољег приноса. Да би се спречило оштећење шаблона, време денатурације на 94 ° Ц треба смањити на 30 секунди или мање по циклусу, а време за повећање температуре на 94 ° Ц пре појачања треба да буде мање од 1 минута. Штавише, подешавање температуре продужења на око 68 ° Ц и пројектовање времена продужења према брзини од 1 кб/мин може обезбедити ефикасно појачавање дугих фрагмената.

    П: Како побољшати веродостојност амплификације ПЦР -а?

    Стопа грешака у амплификацији ПЦР -а може се смањити употребом различитих ДНК полимераза високе верности. Међу свим до сада пронађеним Так ДНК полимеразама, Пфу ензим има најмању стопу грешака и највећу верност (види приложену табелу). Поред селекције ензима, истраживачи могу додатно смањити стопу мутације ПЦР -а оптимизацијом реакционих услова, укључујући оптимизацију састава пуфера, концентрацију термостабилне полимеразе и оптимизацију броја циклуса ПЦР -а.

    Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је