Ултра ХиФиделити ПЦР комплет

Висока верност, висока специфичност и висока ефикасност ПЦР премикса са топлим стартом.

Ултра ХиФиделити ПЦР Кит је нови премикс за амплификацију ПЦР-а високе верности погодан за клонирање и детекцију везано за ПЦР. Ултра ХиФи ДНА полимераза садржана у комплету је нова брза и високо верна ДНК полимераза развијена технологијом усмерене молекуларне еволуције. Повећава афинитет ДНК полимеразе према шаблонима, побољшава брзину амплификације и способност продужења ензима и повећава стопу успешности ПЦР -а и принос производа.

Цат. Не Величина паковања
4992970 1мл
4992971 5*1 мл
4992978 5*5*1 мл

 

 


Детаљи о производу

Експериментални пример

ФАК

Ознаке производа

Карактеристике

■ Лако за руковање: Овај комплет се испоручује као 2 × премикс, а ПЦР се може извести једноставним додавањем шаблона и прајмера.
■ Висока верност: Верност је 50 пута већа од Так полимеразе.
■ Висока специфичност: Одличне перформансе при топлом покретању како би се осигурала специфичност производа.
■ Брзо појачање: Брзина продужења може досећи 10-15 сец/кб.
■ Снажна проширивост: До 20 кб фрагмената ДНК се може амплификовати.
■ Широка применљивост: Комплет садржи ПЦР Енханцер и погодан је за амплификацију високих ГЦ и сложених шаблона.

Спецификација

Тип: ДНК полимераза високе верности
Брзина појачања: 10-15 сец/кб
Величина фрагмента: <20кб
Примене: ПЦР амплификација високе верности, клонирање гена, високо појачање ГЦ шаблона, клонирање гена сложених генома, амплификација високе верности цДНА, детекција СНП-а, мутација специфична за место итд.
Принос екстракције ДНК из различитих биљних ткива:
Напомена: Принос ДНК зависи од врсте узорка. Сви горњи материјали су од нежног лишћа.

Сви производи се могу прилагодити за ОДМ/ОЕМ. За детаље,кликните Прилагођена услуга (ОДМ/ОЕМ)


  • Претходна:
  • Следећи:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Хот старт како би се осигурала специфичност производа
    Слика 1. Ултра ХиФи има одличну функцију врућег покретања како би се осигурала специфичност производа за појачавање. Примењена је метода молекуларних светионика (Ма ет ал., Анал Биоцхем, 2006).
    Experimental Example Одлична висока верност, 50 пута већа од Так полимеразе
    Слика 2. Верност Ултра ХиФи -а је 50 пута већа од оне уобичајене Так полимеразе. Верност полимеризације Так полимеразе (без корективне активности) се користи као референца.
    Experimental Example Брзо појачавање и дуги фрагменти могу се брзо појачати
    Слика 3. Ултра ХиФи може продужити до 5 сек/кб за фрагменте мање од 4 кб. За дугачке фрагменте, време појачања може се на одговарајући начин продужити. За фрагменте веће од 15 кб, брзина опсега може бити до 30 сек/кб. М: ТИАНГЕН Д15000 Маркер
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example Снажна универзалност и висока специфичност, лако читљиви високи ГЦ и дуги фрагменти из различитих извора
    Слика 4. Ултра ХиФи има високу специфичност како би осигурао стопу успеха појачања и количину производа за различите врсте шаблона.
    А. Резултати Ултра ХиФи појачања
    Б. Резултати амплификације ензима Хи-Фи добављача К.
    Ц. Резултати амплификације ензима Хи-Фи добављача Н.
    М: ТИАНГЕН Д15000 Маркер
    Лане 1-5. Резултати појачања шаблона различите дужине: 1. 750 бп; 2. 1 кб; 3.
    2 кб; 4. 4 кб; 5. 6 кб
    Трака 6. Резултат појачања високог ГЦ шаблона: 1915 бп (ГЦ%: 70%);
    Лане 7-11. Резултат појачања 2 кб шаблона из различитих генома: 7. Пацов; 8.
    Пиринач; 9. Пшеница; 10. Кукуруз; 11. Бактерије;
    Трака 12-14. Резултат амплификације са дугим фрагментима од 8 кб: 12. Пиринач; 13. Кукуруз;
    П: Нема појачања

    А-1 Темплате

    ■ Шаблон садржи протеинске нечистоће или инхибиторе Так, итд. - Очистите шаблон ДНК, уклоните протеинске нечистоће или екстрахујте шаблон ДНК комплетима за пречишћавање.

    ■ Денатурација шаблона није потпуна —— Одговарајуће повећати температуру денатурације и продужити време денатурације.

    ■ Деградација шаблона ——Поново припремите шаблон.

    А-2 Пример

    ■ Лош квалитет прајмера —— Поново синтетизујте прајмер.

    ■ Разградња прајмера —— Поделите прајмере велике концентрације у мале запремине ради очувања. Избегавајте вишеструко замрзавање и одмрзавање или дуготрајно криоконзервирање на 4 ° Ц.

    ■ Неправилно обликовање прајмера (нпр. Дужина прајмера није довољна, димер формиран између прајмера итд.) -Преизмењавање прајмера (избегавање стварања димера прајмера и секундарне структуре)

    А-3 мг2+концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 Температура жарења

    ■ Висока температура жарења утиче на везивање прајмера и шаблона. ——Смањите температуру жарења и оптимизујте стање са градијентом од 2 ° Ц.

    А-5 Време продужења

    ■ Кратко време продужења —— Продужите време продужења.

    П: Лажно позитиван

    Феномени: Негативни узорци такође показују траке циљних секвенци.

    А-1 Контаминација ПЦР-ом

    ■ Укрштена контаминација циљне секвенце или продуката амплификације —— Пажљиво да се у негативном узорку не пипетира узорак који садржи циљну секвенцу или да се излије из епрувете за центрифугу. Реагенсе или опрему треба аутоклавирати како би се елиминисале постојеће нуклеинске киселине, а постојање контаминације треба утврдити експериментима са негативном контролом.

    ■ Контаминација реагенса —— Поразделите реагенсе и чувајте на ниској температури.

    А-2 Примеr

    ■ Мг2+ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    ■ Неправилан дизајн прајмера, а циљна секвенца има хомологију са секвенцом без циља. —— Прајмери ​​за поновно дизајнирање.

    П: Неспецифично појачање

    Феномени: ПЦР појачавачке траке нису у складу са очекиваном величином, велике или мале, или се понекад јављају и специфичне појачане појасеве и неспецифичне појачане појасеве.

    А-1 Пример

    ■ Лоша специфичност прајмера

    —— Прајмер за редизајн.

    ■ Концентрација прајмера је превисока —— Правилно повећајте температуру денатурације и продужите време денатурације.

    А-2 мг2+ концентрација

    ■ Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањите концентрацију Мг2+: Оптимизујте Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Превелика количина ензима —— Смањите количину ензима на одговарајући начин у интервалима од 0,5 У.

    А-4 Температура жарења

    ■ Температура жарења је прениска —— Одговарајуће повећајте температуру жарења или усвојите двостепену методу жарења

    А-5 ПЦР циклуси

    ■ Превише циклуса ПЦР -а - Смањите број циклуса ПЦР -а.

    П: Закрпљене или размазане траке

    А-1 Пример—— Лоша специфичност ——Пројектирајте прајмер, промените положај и дужину прајмера како бисте побољшали његову специфичност; или извршите угнежђену ПЦР.

    А-2 ДНК шаблона

    —— Шаблон није чист—— Очистите шаблон или извуците ДНК сетовима за пречишћавање.

    А-3 мг2+ концентрација

    ——Мг2+ концентрација је превисока —— Правилно смањити Мг2+ концентрација: Оптимизовати Мг2+ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг2+ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

    А-4 дНТП

    —— Концентрација дНТП -а је превисока —— Смањите концентрацију дНТП -а на одговарајући начин

    А-5 Температура жарења

    —— Прениска температура жарења —— Одговарајуће повећати температуру жарења

    Циклуси А-6

    —— Превише циклуса ——Оптимизујте број циклуса

    П: Колико ДНК шаблона треба додати у 50 μл ПЦР реакциони систем?
    ytry
    П: Како појачати дугачке фрагменте?

    Први корак је одабир одговарајуће полимеразе. Обична Так полимераза не може се лекторисати због недостатка 3'-5 'егзонуклеазне активности, а неусклађеност ће у великој мери смањити ефикасност продужења фрагмената. Због тога обична Так полимераза не може ефикасно појачати циљне фрагменте веће од 5 кб. Так полимеразу са посебном модификацијом или другу полимеразу високе верности треба изабрати како би се побољшала ефикасност продужења и задовољиле потребе појачања дугих фрагмената. Осим тога, појачавање дугих фрагмената такође захтева одговарајуће прилагођавање дизајна прајмера, време денатурације, време продужења, пХ пуфера итд. Обично прајмери ​​са 18-24 бп могу довести до бољег приноса. Да би се спречило оштећење шаблона, време денатурације на 94 ° Ц треба смањити на 30 секунди или мање по циклусу, а време за повећање температуре на 94 ° Ц пре појачања треба да буде мање од 1 минута. Штавише, подешавање температуре продужења на око 68 ° Ц и пројектовање времена продужења према брзини од 1 кб/мин може обезбедити ефикасно појачавање дугих фрагмената.

    П: Како побољшати веродостојност амплификације ПЦР -а?

    Стопа грешака у амплификацији ПЦР -а може се смањити употребом различитих ДНК полимераза високе верности. Међу свим до сада пронађеним Так ДНК полимеразама, Пфу ензим има најмању стопу грешака и највећу верност (види приложену табелу). Поред селекције ензима, истраживачи могу додатно смањити стопу мутације ПЦР -а оптимизацијом реакционих услова, укључујући оптимизацију састава пуфера, концентрацију термостабилне полимеразе и оптимизацију броја циклуса ПЦР -а.

    Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је