ТГуиде С96 Маки комплет за циркулишућу ДНК

А-1 Ниска концентрација ћелија или вируса у почетном узорку-Обогатите концентрацију ћелија или вируса.

А-2 Недовољна лиза узорака-Узорци нису добро помешани са пуфером за лизу. Предлаже се да се 1-2 пута темељито измеша пулсним вртложењем. - Недовољна лиза ћелија узрокована смањењем активности протеиназе К. - Недовољна лиза ћелија или разградња протеина услед недовољног времена топлог купања. Предлаже се да се ткиво исече на мале комаде и продужи време купања како би се уклонили сви остаци у лизату.

А-3 Недовољна адсорпција ДНК. —Не је додан етанол или нископроцентни уместо 100% етанола пре него што је лизат пребачен у спин колону.

А-4 пХ вредност пуфера за испирање је прениска. -Подесите пХ на између 8,0-8,3.

Остатак етанола у елуенту.

—У елуенту постоји преостали пуфер за испирање ПВ. Етанол се може уклонити центрифугирањем центрифугиране колоне 3-5 минута, а затим стављањем на собну температуру или у инкубатор од 50 ° Ц током 1-2 минуте.

А-1 Узорак није свеж. —Извуците позитивну ДНК узорка као контролу да бисте утврдили да ли се ДНК у узорку разградила.

А-2 Неправилно претходно третирање. - Узроковано прекомерним млевењем течног азота, враћањем влаге или превеликом количином узорка.

Претходни третмани треба да се разликују за различите узорке. За узорке биљака, темељито их самељите у течном азоту. За узорке животиња, хомогенизујте или темељито самељите у течном азоту. За узорке са ћелијским зидовима који се тешко ломе, попут Г+ бактерија и квасца, препоручује се употреба лизозима, литиказе или механичких метода за разбијање ћелијских зидова.

4992201/4992202 Кит за биљну геномску ДНК усваја методу засновану на колони која захтева хлороформ за екстракцију. Посебно је погодан за различите узорке биљака, као и биљни суви прах. Хи-ДНАсецуре Плант Кит је такође базиран на колони, али без потребе за екстракцијом фенола/хлороформа, што га чини безбедним и нетоксичним. Погодан је за биљке са високим садржајем полисахарида и полифенола. 4992709/4992710 ДНАкуицк Плант Систем усваја метод заснован на течности. Екстракција фенола/хлороформа такође није потребна. Поступак пречишћавања је једноставан и брз, без ограничења за почетне количине узорка, тако да корисници могу флексибилно прилагодити количину према експерименталним захтевима. Велике величине фрагмената гДНА могу се добити са високим приносом.

Геномска ДНК је екстрахована из различитих запремина узорака целе људске крви помоћу ТИАНамп Блоод ДНА Кит. Резултати су следећи. Резултати су наведени само као референца, стварни резултати екстракције зависе од услова узорака.

Екстракција ДНК крвног угрушка може се извршити помоћу реагенса наведених у ова два сета једноставном променом протокола у специфичне инструкције за екстракцију ДНК крвног угрушка. Софт копија протокола екстракције ДНК крвног угрушка може се издати на захтев.

Свежи узорак суспендовати са 1 мл ПБС, нормалне физиолошке отопине ​​или ТЕ пуфера. Потпуно хомогенизујте узорак хомогенизатором и сакупите талог на дно епрувете центрифугирањем. Одложите супернатант и ресуспендујете талог са 200 μл пуфера ГА. Следеће пречишћавање ДНК може се извршити према упутству.

За пречишћавање гДНК у узорцима плазме, серума и телесних течности препоручује се ТИАНамп Мицро ДНА Кит. За пречишћавање гДНА вируса из узорака серума/плазме препоручује се ТИАНамп Вирус ДНА/РНА Кит. За пречишћавање бактеријске гДНК из узорака серума и плазме препоручује се ТИАНамп Бацтериа ДНА Кит (за позитивне бактерије треба укључити лизозим). За узорке пљувачке препоручује се Хи-Сваб ДНА Кит и ТИАНамп Бацтериа ДНА Кит.

За екстракцију генома гљива препоручују се ДНАсецуре Плант Кит или ДНАкуицк Плант Систем. За екстракцију генома квасца препоручује се ТИАНамп комплет ДНК квасца (литиказу треба припремити самостално).