2 × Так Платинум ПЦР Мик

Ултра чиста ХотСтарт термостабилна ДНК полимераза високе верности.

Так Платинум ДНА Полимерасе је хемијски модификована ХотСтарт Так полимераза са 3′-5 ′ егзонуклеазном активношћу и 5′-3 ′ егзонуклеазном активношћу. Ензимска активност Так Платинум ДНА полимеразе је блокирана на собној температури. Његова активност се може активирати тек након загревања на 94 ° Ц током 5-10 минута, чиме се избегава неспецифична амплификација узрокована неспецифичним жарењем прајмера или димер прајмера на ниској температури пре почетног циклуса ПЦР реакције, и значајно побољшава осетљивост и специфичност ПЦР реакције. Осим тога, Так Платинум ДНА полимераза има веома високу верност, што је друго најбоље од Пфу полимеразе. Брзина продужења полимеризације ДНК је бржа од Пфу полимеразе и ефикасност амплификације је већа.

Цат. Не	Величина паковања
4992789	5к1мл
4992790	5 × 1 мл

Пошаљите нам е -пошту

Детаљи о производу

Експериментални пример

ФАК

Ознаке производа

Дефиниција активности

1 јединица (У) Так Платинум ДНА Полимеразна активност је дефинисана као количина ензима потребна за инкорпорирање 10 нмол деоксинуклеотида у супстанце растворљиве у киселини на 74 ° Ц у року од 30 минута користећи активирану ДНК сперме лососа као шаблон/прајмер.

Контрола квалитета

Чистоћа помоћу СДС-ПАГЕ детекције је већа од 99%; Није откривена активност егзогене нуклеазе; Ген са једном копијом у људском геному могао би се ефикасно појачати; Нема значајних промена активности ако се чувају на собној температури недељу дана.

Главни технички параметри

Има 5′-3 ′ егзонуклеазну активност и 3′-5 ′ егзонуклеазну активност, а његова верност је поред Пфу полимеразе. Брзина продужавања Так Платинум Полимерасе је бржа од Пфу полимеразе и ефикасност појачања је већа. ПЦР производи се могу директно везати на тупи крај или клонирати са ТА вектором. Ако је потребно побољшати ефикасност клонирања, препоручује се прво прочишћавање и додавање преграда од 3'-дА пре клонирања у ТА вектор.

Так Платинум МастерМик са једном цеви (Национална сертификација производа високе технологије)

■ Так Платинум МастерМик је побољшао специфичност и осетљивост ПЦР реакције и може појачати сложене шаблоне са високим садржајем ГЦ, секундарном структуром и слично. Могу се појачати само 2 копије циљног шаблона, обезбеђујући прецизније експерименталне резултате.

■ Јединствена Так Платинум МастерМик формула чини читав реакциони систем веома стабилним, а на активност неће утицати понављано замрзавање-одмрзавање или дуготрајно складиштење на 4 ° Ц.

■ Стабилан и ефикасан унапред припремљен ПЦР мешани раствор може учинити операцију брзом и једноставном, значајно смањујући интензитет рада и грешке у узорковању. ПЦР појачивач и оптимизатор високих перформанси су такође укључени у мешавину, што смањује захтеве у погледу ПЦР услова.

■ Овај производ има системе који садрже боје и боје. МастерМик производи који садрже боје могу се директно електрофорезирати након ПЦР-а, без додавања пуфера за пуњење.

Апликације

Може да замени Пфу полимеразу како би појачао производе високе верности из сложених шаблона као што су геноми, а погодан је за апликације као што су клонирање експресионих гена, мутације специфичне за место и анализа полиморфизма појединачних нуклеотида (СНП) итд.

Мере предострожности при дизајнирању ПЦР прајмера:

Дужина прајмера је обично 20-25 мер. Међутим, када се ради ПЦР са дугим фрагментима, дужину прајмера треба повећати на 30-35 мер.

■ Не постоји комплементарно упаривање између два прајмера, посебно за последње 3 базе на 3 ′ крају.

■ Садржај ГЦ треба да буде 50-60%и избегавајте локалне богате ГЦ или АТ. Да бисте осигурали стабилно везивање прајмера и шаблона, избегавајте АТ богату структуру на 3 ′ крају.

■ Избегавајте да прајмер формира секундарну структуру.

■ Изаберите два прајмера са Тм температурама које су близу једна другој.

Израчунавање Тм вредности прајмера за ПЦР:

■ Када је прајмер мањи од 20 мер: Тм = 2 ° Ц × (А+Т)+4 ° Ц × (Г+Ц).

■ Када је прајмер већи од 20 мер: Тм = 81,5+0,41 × (ГЦ%)-600/Л, где је Л дужина прајмера.

■ Подесите температуру жарења на (Тм-5) ° Ц.

ПЦР Пример улаз

Одговарајућа коначна концентрација прајмера може се изабрати између 0,1 μМ и 1,0 μМ. Прениска концентрација прајмера доводи до ниског приноса продуката амплификације, док је превисока концентрација прајмера склонија неспецифичном појачању. Обично, када је количина шаблона ДНК велика или се сложена ДНК шаблона (попут ДНК људског генома) користи као шаблон, концентрација прајмера би требала бити нижа. Када је количина шаблона ДНК мала или се као шаблон користи једноставна шаблонска ДНК (нпр. ДНК плазмида, итд.), Концентрација прајмера треба да буде већа.

Сви производи се могу прилагодити за ОДМ/ОЕМ. За детаље,кликните Прилагођена услуга (ОДМ/ОЕМ)

Претходна: 2 × ХотСтарт Так ПЦР Мик

Следећи: 2 × Так Плус ПЦР микс

Користите геномску ДНК као шаблон за амплификацију 1 кб фрагмента. Након ПЦР реакције, узмите 5 μл за детекцију електрофорезе.

П: Нема појачања

А-1 Темплате

■ Шаблон садржи протеинске нечистоће или инхибиторе Так, итд. - Очистите шаблон ДНК, уклоните протеинске нечистоће или екстрахујте шаблон ДНК комплетима за пречишћавање.

■ Денатурација шаблона није потпуна —— Одговарајуће повећати температуру денатурације и продужити време денатурације.

■ Деградација шаблона ——Поново припремите шаблон.

А-2 Пример

■ Лош квалитет прајмера —— Поново синтетизујте прајмер.

■ Разградња прајмера —— Поделите прајмере велике концентрације у мале запремине ради очувања. Избегавајте вишеструко замрзавање и одмрзавање или дуготрајно криоконзервирање на 4 ° Ц.

■ Неправилно обликовање прајмера (нпр. Дужина прајмера није довољна, димер формиран између прајмера итд.) -Преизмењавање прајмера (избегавање стварања димера прајмера и секундарне структуре)

А-3 мг²⁺концентрација

■ Мг²⁺ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг²⁺концентрација: Оптимизовати Мг²⁺ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг²⁺ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

А-4 Температура жарења

■ Висока температура жарења утиче на везивање прајмера и шаблона. ——Смањите температуру жарења и оптимизујте стање са градијентом од 2 ° Ц.

А-5 Време продужења

■ Кратко време продужења —— Продужите време продужења.

П: Лажно позитиван

Феномени: Негативни узорци такође показују траке циљних секвенци.

А-1 Контаминација ПЦР-ом

■ Укрштена контаминација циљне секвенце или продуката амплификације —— Пажљиво да се у негативном узорку не пипетира узорак који садржи циљну секвенцу или да се излије из епрувете за центрифугу. Реагенсе или опрему треба аутоклавирати како би се елиминисале постојеће нуклеинске киселине, а постојање контаминације треба утврдити експериментима са негативном контролом.

■ Контаминација реагенса —— Поразделите реагенсе и чувајте на ниској температури.

А-2 Примеr

■ Мг²⁺ концентрација је прениска —— Правилно повећајте Мг²⁺ концентрација: Оптимизовати Мг²⁺ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг²⁺ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

■ Неправилан дизајн прајмера, а циљна секвенца има хомологију са секвенцом без циља. —— Прајмери за поновно дизајнирање.

П: Неспецифично појачање

Феномени: ПЦР појачавачке траке нису у складу са очекиваном величином, велике или мале, или се понекад јављају и специфичне појачане појасеве и неспецифичне појачане појасеве.

А-1 Пример

■ Лоша специфичност прајмера

—— Прајмер за редизајн.

■ Концентрација прајмера је превисока —— Правилно повећајте температуру денатурације и продужите време денатурације.

А-2 мг²⁺ концентрација

■ Мг²⁺ концентрација је превисока —— Правилно смањите концентрацију Мг2+: Оптимизујте Мг²⁺ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг²⁺ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

А-3 Термостабилна полимераза

■ Превелика количина ензима —— Смањите количину ензима на одговарајући начин у интервалима од 0,5 У.

А-4 Температура жарења

■ Температура жарења је прениска —— Одговарајуће повећајте температуру жарења или усвојите двостепену методу жарења

А-5 ПЦР циклуси

■ Превише циклуса ПЦР -а - Смањите број циклуса ПЦР -а.

П: Закрпљене или размазане траке

А-1 Пример—— Лоша специфичност ——Пројектирајте прајмер, промените положај и дужину прајмера како бисте побољшали његову специфичност; или извршите угнежђену ПЦР.

А-2 ДНК шаблона

—— Шаблон није чист—— Очистите шаблон или извуците ДНК сетовима за пречишћавање.

А-3 мг²⁺ концентрација

——Мг²⁺ концентрација је превисока —— Правилно смањити Мг²⁺ концентрација: Оптимизовати Мг²⁺ концентрација низом реакција од 1 мМ до 3 мМ са интервалом од 0,5 мМ за одређивање оптималног Мг²⁺ концентрација за сваки шаблон и прајмер.

А-4 дНТП

—— Концентрација дНТП -а је превисока —— Смањите концентрацију дНТП -а на одговарајући начин

А-5 Температура жарења

—— Прениска температура жарења —— Одговарајуће повећати температуру жарења

Циклуси А-6

—— Превише циклуса ——Оптимизујте број циклуса

П: Колико ДНК шаблона треба додати у 50 μл ПЦР реакциони систем?

П: Како појачати дугачке фрагменте?

Први корак је одабир одговарајуће полимеразе. Обична Так полимераза не може се лекторисати због недостатка 3'-5 'егзонуклеазне активности, а неусклађеност ће у великој мери смањити ефикасност продужења фрагмената. Због тога обична Так полимераза не може ефикасно појачати циљне фрагменте веће од 5 кб. Так полимеразу са посебном модификацијом или другу полимеразу високе верности треба изабрати како би се побољшала ефикасност продужења и задовољиле потребе појачања дугих фрагмената. Осим тога, појачавање дугих фрагмената такође захтева одговарајуће прилагођавање дизајна прајмера, време денатурације, време продужења, пХ пуфера итд. Обично прајмери са 18-24 бп могу довести до бољег приноса. Да би се спречило оштећење шаблона, време денатурације на 94 ° Ц треба смањити на 30 секунди или мање по циклусу, а време за повећање температуре на 94 ° Ц пре појачања треба да буде мање од 1 минута. Штавише, подешавање температуре продужења на око 68 ° Ц и пројектовање времена продужења према брзини од 1 кб/мин може обезбедити ефикасно појачавање дугих фрагмената.

П: Како побољшати веродостојност амплификације ПЦР -а?

Стопа грешака у амплификацији ПЦР -а може се смањити употребом различитих ДНК полимераза високе верности. Међу свим до сада пронађеним Так ДНК полимеразама, Пфу ензим има најмању стопу грешака и највећу верност (види приложену табелу). Поред селекције ензима, истраживачи могу додатно смањити стопу мутације ПЦР -а оптимизацијом реакционих услова, укључујући оптимизацију састава пуфера, концентрацију термостабилне полимеразе и оптимизацију броја циклуса ПЦР -а.

Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је

Категорије производа

ЗАШТО ИЗАБРАТИ НАС

Наша фабрика од свог оснивања развија производе прве класе поштујући принцип
прво квалитета. Наши производи стекли су одличну репутацију у индустрији и драгоцено поверење међу новим и старим купцима.

УПИТ